更新日期:2023-12-14
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廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
所在城市:上海市
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入被Alexa Fluor 488染料標志的dUTP,使凋亡的細胞被標志上綠色熒光,從而可以用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。
本試劑盒為直接熒光標志法的TUNEL染色,染色步驟簡便,應(yīng)用范圍廣泛,可用于檢測冰凍切片、石蠟切片和培養(yǎng)細胞的凋亡情況。
包裝清單:
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝1 | 包裝2 |
SJ1272 | TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 488) | 20T | 50T |
● | 說明書 | 一份 |
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品組成:
編號 | 組分 | 20T | 50T |
試劑(A) | 50× Proteinase K | 20 ul | 100 ul |
試劑(B) | 10 × DNase I Buffer | 100 ul | 500 ul |
試劑(C) | DNase I | 20 ul | 100 ul |
試劑(D) | Equilibration Buffer | 2 ml | 10 ml |
試劑(E) | 5×TdT Enzyme Buffer | 200 ul | 1 ml |
試劑(F) | Recombinant TdT Enzyme | 20 ul | 100 ul |
試劑(G) | Alexa Fluor 488-dUTP | 20 ul | 100 ul |
試劑(H) | dATP | 20 ul | 100 ul |
試劑(I) | 封片劑(含DAPI) | 1.5 ml | 7.5 ml |
保存條件:
-20 ℃保存,一年有效。
操作步驟:
1、樣本處理:
a) 石蠟切片:經(jīng)二甲笨、酒精脫蠟,復(fù)水。脫蠟應(yīng)充分。
b) 冰凍切片:流水沖洗,去除OCT包埋膠后,用純水洗3次。
c) 細胞飛片:用組織固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘,用PBS洗三次,每次5分鐘。
2、蛋白酶消化
將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中,滴加到組織上,37℃孵育10-20分鐘。消化結(jié)束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。
3、陽性對照組織的處理
將組織用DNase I消化,以獲得斷裂的DNA,即成Tunel染色陽性的對照。陽性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。
純水 | 46 ul |
試劑(B): 10 × DNase I Buffer | 5 ul |
試劑(C): DNase I | 1 ul |
共計 | 50 ul |
將50 ul DNase I消化液滴加于組織上,37℃孵育10-30分鐘,消化結(jié)束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。
4、Tunel標志染色:
Tunel標志染色前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過程中按下表配制Tunel染色工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul Tunel染色液,37℃孵育1-2小時,染色結(jié)束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。
試劑(D)Equilibration Buffer | 37 ul |
試劑(E)5×TdT Enzyme Buffer | 10 ul |
試劑(F)Recombinant TdT Enzyme | 1 ul |
試劑(G)Alexa Fluor 488-dUTP | 1 ul |
試劑(H)dATP | 1 ul |
共計 | 50 ul |
5、封片:
每組織上滴加一滴封劑,小心蓋上蓋玻片,避免產(chǎn)生氣泡。用吸水紙吸去多余的封片劑。熒光顯微鏡下觀察。
注意事項:
1、Proteinase K 消化時間需要摸索,冰凍切片 10 min 左右,石蠟切片時間應(yīng)適當延長。
2、陰性對照體系:配制Tunel染色工作液時用純水替代TdT Enzyme。
3、懸浮細胞用離心的方法收集細胞,所有反應(yīng)在離心管中進行,染色結(jié)束后,可在熒光顯微下觀察,也可以用流式細胞儀檢測。
4、Tunel標志染色時應(yīng)注意避光。
5、實驗過程中請穿戴手套、實驗服等,做好個人防護。
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