cck8細胞增殖檢測試劑盒的原理是什么?
更新時間:2023-10-13 點擊次數(shù):3777次
cck8細胞增殖檢測試劑盒是一種常用于評估細胞增殖和生存能力的試劑。它基于雙氮唑黃(WST-8)的化學(xué)反應(yīng)原理。WST-8是一種水溶性二硫蘇糖鹽,當(dāng)與電子傳遞介質(zhì)1-甲基四氫唑硫代甘汞(MTS)混合時,可以通過細胞內(nèi)還原酶的活性來檢測細胞數(shù)量。
在
cck8細胞增殖檢測試劑盒中,WST-8與MTS以及一種電子傳遞介質(zhì)PMS(鄰苯二酚硫酸鹽)混合。當(dāng)此混合物加入到細胞培養(yǎng)體系中時,細胞內(nèi)的還原酶(如脫氫酶等)會將WST-8還原成形成橙色產(chǎn)物的可溶性熒光物。這個橙色產(chǎn)物的量與細胞數(shù)量成正比。
在實驗中,將待測的細胞接種在培養(yǎng)皿或孔板中,并進行不同處理組和對照組。接下來,將CCK-8試劑加入每個孔中,并進一步孵育一段時間,使細胞內(nèi)的還原酶與試劑發(fā)生反應(yīng)。在反應(yīng)結(jié)束后,通過測量溶液中產(chǎn)生的橙色產(chǎn)物吸光度的變化,可以間接地評估細胞數(shù)量。
使用吸光度檢測儀器,以450納米作為測試波長,測量樣品的吸光度值。吸光度值的增加與細胞數(shù)量的增加成正比。通常,吸光度值越高,說明細胞數(shù)量越多,代表細胞增殖能力較強;相反,吸光度值較低則表示細胞數(shù)量較少,代表細胞增殖能力較弱。
總結(jié)起來,cck8細胞增殖檢測試劑盒利用細胞內(nèi)的還原酶活性將WST-8還原成可溶性熒光物,通過測量熒光物的吸光度變化,間接評估細胞數(shù)量,從而達到評估細胞增殖和生存能力的目的。這種方法簡便、快速,廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)和藥理學(xué)研究中。